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多功能酶标仪应用之时间分辨荧光技术
作者:admin

时间分辨荧光技术是以镧系元素作为标记物的一种免疫检测技术。其原理是镧系元素(如Eu3+)具有长寿命的发射荧光,标记待检测物质后,使用特定激发光激发,通过一定的检测时间延迟来达到扣除本底荧光的目的,并以此来提高信噪比与检测灵敏度。山西逸凡科技ope体育客服电话代理的美国BioTek多款酶标仪中,Synergy系列及Cytation系列均可完成时间分辨荧光的检测,并具有良好的检测结果。最小检测限可达40 fM Eu (小体积384孔板)。

 

 

时间分辨荧光(精度:10-18mol/L )与以下标记免疫技术相比

优点:精度高 

放射免疫 (精度:10-12mol/L ) 最早出现,发展成熟   稳定性差,有危害,操作繁琐

酶联免疫 (精度:10-9  mol/L )安全        灵敏度、重复性差

化学发光 (精度:10-15mol/L ) 测定速度快、灵敏度高   样品不能重复测定试剂稳定性差,试剂价格高

电化学发光 (精度:10-17mol/L )本底较小、灵敏度较高    非开放性试剂系统、不能做科研  价格高

 

  1979年,提出“时间分辨荧光免疫分析”理论,1989年该技术获诺贝尔化学奖提名。

  90年代以来,时间分辨荧光分析技术因其灵敏度高,操作简便,标准曲线范围宽,不受样品自然荧光干扰,无放射性污染等特点,其方法学研究和临床应用的发展十分迅速。

  用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物,标记抗原、抗体、激素、核酸探针等物质

  当反应体系发生后,如抗原抗体免疫反应、核酸探针杂交等反应,经解离—增强作用,用时间分辨荧光仪,测定最后产物的荧光强度

  根据荧光强度和相对荧光强度比值,判断反应体系中分析物的浓度,达到定量分析的目的

常规荧光免疫测定技术易受待测样品中非特异本底荧光的干扰,灵敏度受到一定限制。于是,20世纪80年代初,在常规荧光免疫分析的基础上发展了一种新型免疫分析技术——时间分辨荧光免疫测定(time-resolved  fluoroimmunoassay,TRFIA)。其原理和方法与常规荧光免疫不同,所用标记物不是普通荧光物质,而是镧系稀土元素铕(Eu3+)、钐(Sm3+)、铽(Tb3+)等[8],检测设备也不同于一般的荧光分光光度计,而是使用时间分辨荧光计测量排除样品中非特异荧光的干扰,极大地提高了测定方法的灵敏度[9]。TRFIA在灵敏度、特异性、稳定性及测量自动化程度等方面都可与放射免疫测定(RIA)相媲美,而其标准曲线范围宽(跨越4—5个数量级),最小检出值可达10—18mol/L,分析速度快,远远超过RIA、EM及发光免疫测定,并具操作简便,无放射 性污染,因此成为免疫分析中最具发展潜力的一项技术[10] 。TRFIA的基本原理是:将镧系元素铕(Eu3+)、钐(Sm3+)、铽(Tb3+)等通过具有双功能基团的螯合剂标记于抗体(或抗原)分子上。当标记抗体和待测抗原结合,采用紫外脉冲光(340nm,每秒闪烁1 000次)进行激发,不仅发射出高强度的荧光(613nm),而且衰变时间也较长(10~1 000us)。利用延缓测量时间,待短寿的本底荧光(样品池和待测样品中蛋白质等自然发生的非特异性荧光,衰变时间1—10ns)全部衰变后,再行测量,所得信号完全为长寿命镧系元素螯合物的特异荧光,从而有效排除非特异本底荧光的干扰,大大提高分析的特异性和灵敏度。此外,Eu3+或Sm3+的激发光与发射光之间有很大的Stokes位移,而且激发光的光谱较宽,有利于增高激发能,增强标记物的比活性;且发射荧光的谱带很窄,有助于降低本底,从而提高分析的特异性和灵敏度。

发布时间:2016-05-20 周五
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